Что такое фрагментация ДНК сперматозоидов, типы тестов и расшифровка, цены

Notice: Trying to access array offset on value of type bool in /home/m/menemtpu/pocki.top/public_html/wp-content/themes/root/inc/admin-ad.php on line 49 Notice: Trying to access array offset on value of type bool in /home/m/menemtpu/pocki.top/public_html/wp-content/themes/root/inc/admin-ad.php on line 283 Notice: Trying to access array offset on value of type bool in /home/m/menemtpu/pocki.top/public_html/wp-content/themes/root/inc/admin-ad.php on line 328

Tunel анализ

TUNEL-анализ представляет собой метод, который непосредственно измеряет повреждение ДНК сперматозоидов, путем присоединения дезоксиуридинтрифосфата (dUTP) к одно- и двухцепочечным разрывам ДНК с использованием терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы.

При этом анализе есть возможность:

  1. Количественной оценки методом проточной цитометрии;
  2. Качественного определения с помощью флуоресцентной или световой микроскопии.

Значения, полученные при измерении количества используется как показатель оценки мужского бесплодия. Учёные медики считают, что беременность затруднена, если SDF, показанный в анализе TUNEL, превышает 12%. Анализ может быть выполнен с небольшим количеством сперматозоидов (200 сперматозоидов или меньше) в сперме или при биопсии яичка, поскольку отдельные клетки можно отличить друг от друга.

Этот метод выгоден отсутствием дополнительных затрат, ведь никаких новых реактивов и оборудования не требуется. Большинство клиник по лечению бесплодия могут проводить тесты на имеющихся в наличии флуоресцентных антителах и высококачественных микроскопах.

Однако этот метод более дорогой, чем другие. А результаты могут варьировать в зависимости от исследователя и лаборатории. То есть он имеет высокую субъективную и межлабораторную вариабельность. Также он ограничен в оценке незрелых клеток, таких как клетки с высокой окрашиваемостью ДНК в SCSA.

отсутствие дополнительных затрат, т.к. никаких новых реактивов и оборудования не требуется

метод более дорогой, чем другие

результаты могут варьировать в зависимости от исследователя и лаборатории

ограничен в оценке незрелых клеток

Анализ дисперсии хроматина сперматозоидов – scd

SCD-анализпредставляет собой метод тестирования, основанный на характерном «свечении» («нимбе»), которое образуется при удалении ядерных белков после денатурации кислоты. Другими словами, ядра сперматозоидов с серьезным повреждением ДНК будут образовывать очень маленький «нимб» или вообще его не иметь. В то время как сперма с меньшим повреждением ДНК будет рассеивать петли ДНК и образовывать большое «свечение».

Это экономически оправданный метод, который обычно используется в лабораториях мужского бесплодия, поскольку он прост, быстр, имеет высокую воспроизводимость и не требует сложных инструментов. Кроме того, управление качеством также является простым.

Однако периферийная граница «нимба» с низкой плотностью хроматина может иногда не отличаться от фона и не все «свечения»находятся в одной фокальной плоскости. Это может вызвать ошибки. А поскольку хвост спермы не сохраняется, сперма должна отличаться от других, случайно попавших сюда клеток.

Неоспорима важность тестирования SDF в обследовании пар, борющихся с проблемами фертильности. А также это имеет значение при стратегиях консультирования пациентов с высоким SDF на основе наблюдений, касающихся взаимосвязи между целостностью ДНК спермы и исходами беременности.

Многие исследования показали, что повреждение ДНК спермы влияет на естественное зачатие. На основании анализа SCSA сделан вывод, что высокий SDF затрудняет естественное зачатие. Естественное зачатие было почти невозможно, когда SCSA обнаружил SDF более 30%.

Кроме того, более высокая степень повреждения ДНК спермы у пар, планирующих беременность без предварительного обследования фертильности, показало в исследованиях, что им требуется больше времени для естественного зачатия и имеется пониженная вероятность успешного развития беременности.

Таким образом, тестирование SDF имеет значение для обследования мужской фертильности при попытках естественного зачатия и может применяться для пар, борющихся с бесплодием по неизвестной причине. Метод должен использоваться при консультировании таких пар относительно желания забеременеть.

экономически оправданный методпростбыстримеет высокую воспроизводимостьне требует сложных инструментовможет вызвать ошибки, т.к. периферийная граница «нимба» с низкой плотностью хроматина может иногда не отличаться от фона и не все «свечения»находятся в одной фокальной плоскости

Анализ структуры хроматина сперматозоидов (scsa)

Многие тесты были разработаны для измерения повреждения ДНК сперматозоидов, но все они используют слегка разные процедуры и приводят к различным стандартам измерения. Тест SCSA – наиболее широко применяемый на практике метод.

Он заключается в обработке спермы химическим красителем.В результате повреждённая ДНК спермы окрашивается в красный, а нормальная – в зелёный цвета. Степень денатурации ДНК определяется путем измерения изменений цвета акридинового оранжевого в ДНК от зеленой флуоресценции до красной флуоресценции после тепловой или кислотной обработки.

После окрашивания образец пропускается через чувствительную компьютеризированную аппаратуру со специальным программным обеспечением, которое считывает около 5000 сперматозоидов, классифицируя соотношение зеленых и красных. Так определяется индекс фрагментации (DFI).

Проведение исследований показало, что тестирование SCSA обнаружило повышенное содержание сперматозоидов с фрагментацией приблизительно у 20% пар, обследование которых ранее не дало никакого объяснения бесплодия.

Разработанный в 1970-х годах, SCSA несколько раз пересматривался, прежде чем стать наиболее распространенным, коммерчески используемым тестом для изучения причин мужского бесплодия, связанных с повреждением ДНК спермы и аномалиями хроматина.

Наиболее важными параметрами исследования являются:

  1. Индекс фрагментации ДНК (DFI,%), который указывает количество клеток с повреждением ДНК.
  2. HDS (%), который указывает долю незрелой спермы с дефектами в гистоне к протамину.

В более ранних исследованиях медики предполагали, что DFI 30% или выше, а показатель HDS 15% и выше, указывают на то, что вероятность оплодотворения «in vivo» будет близка к нулю. Позже учёные сообщили, что показатели HDS 15% и выше были связаны с более низким уровнем оплодотворения «invitro»(ЭКО).

То есть порог в 15% может быть показателем для ICSI –интраплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку. Что показывает, что мужчины с высоким уровнем DFI (30% или выше) подвергаются большему риску низкого переноса бластоциты.

Это создает трудности для вынашивания беременности. Вышеперечисленные параметры могут предоставить ценную прогностическую информацию для пар, планирующих ЭКО или ИКСИ. Подготовка к ним может иметь большую эффективность с использованием результатов тестирования.

Преимущества теста состоят:

  1. В возможности быстрого анализа большого количества сперматозоидов из множества образцов могут быть быстро проанализированы;
  2. В высокой воспроизводимости;
  3. Отсутствии влияния замораживания на результаты теста, что делает его более гибким.

Недостатки заключаются в том, что:

  1. Для проведения испытаний требуется дорогостоящее оборудование.
  2. Нужна высокая концентрация сперматозоидов.
  3. Необходимо откалибровать эталонный диапазон для образца.

Интерпретация результатов фрагментации ДНК:

Расшифровка анализов всегда неоднозначна. Важное значение имеет клиническая оценка специалиста по поводу всей, конкретной ситуации в целом. Поэтому в медицине диагностика – индивидуальна в каждом конкретном случае.

Относительно вопросов, возникающих при получении результатов теста фрагментации ДНК, нужно задать их своему лечащему врачу. Чаще всего отчёт теста SCSA содержит ключ с четырьмя значениями, которые могут помочь понять результаты самостоятельно:

  • Отлично: меньше или равно 15% DFI.
  • Хорошо:более 15% но менее 25% DFI.
  • Плохо: больше или равно 25% до 50% DFI.
  • Очень плохо: больше или равно 50% DFI.

Следовательно, пациент с DFI 8,2% попадет в категорию «отлично». Процентное соотношение сперматозоидов, содержащих повреждение ДНК составляет здесь 8,2%.

Тест SCSA рекомендуется для того, чтобы пациенты с процентным содержанием DFI в анализе выше 25%,  пропустили внутриматочную инсеминацию (IUI), сразу перейдя к ЭКО с применением ICSI – интраплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку, для наибольшего успеха.

Клиническая полезность фрагментации ДНК.

Недавнее исследование показало, что у пациентов с DFI%, превышающим или равным 29%, значительно улучшился исход переноса оплодотворённого зародыша,  при хирургических методах получения сперматозоидов (например, TESE / TESA, PICSI, IMSI) по сравнению с отсутствием процедуры вмешательства.

Тем не менее, другие исследования показывают, что существует небольшая разница в показателях беременности при ЭКО между нормальной и патологической фрагментацией ДНК.

Тестирование фрагментации ДНК проводилось в течение нескольких десятилетий. В результате широко распространено мнение, что бесплодие и фрагментация ДНК сперматозоидов связаны. Но этот тест до сих пор еще не является стандартным инструментом в клиниках по лечению бесплодия.

Ясно, что необходимо провести дополнительные исследования клинической полезности фрагментации ДНК. Хотя тест на фрагментацию ДНК предоставляет дополнительную опцию для тестирования мужской фертильности, он, безусловно, имеет ограничения – может рассчитать процент разрушенной ДНК в сперме, однако, где происходят эти разрывы и на какие конкретно гены не определяет.

может рассчитать процент разрушенной ДНКгде происходят эти разрывы и на какие конкретно гены не определяет

Анализы на фрагментацию днк спермы

Тестирование на фрагментацию ДНК спермы – определение уровня повреждений, наблюдаемых в ДНК спермы. Он предполагает вычисление процентного содержания в исследуемом материале сперматозоидов, имеющих разрывы в ДНК.

Сперматозоиды очень маленькие (самые маленькие клетки организма), но им нужно нести огромное количество генетической информации, которую при оплодотворении один из них добавит в яйцеклетку. Совместный генетический материал обеих этих гамет – мужской и женской, в итоге даст абсолютно уникальную генетическую основу для развития нового организма человека.

С таким количеством ДНК, упакованной в крошечную головку сперматозоида, возникают повреждения в хромосомах – разрывы ДНК. За последние десятилетия были проведены значительные исследования, позволившие определить как количество повреждений, наблюдаемых в ДНК сперматозоидов, может быть использовано в качестве маркера мужского бесплодия.

Но при том, что понимание повреждения ДНК спермы выросло, точная причина этого явления остается неизвестной.

Количество обнаруженных повреждений спермы не всегда соответствует таким параметрам сперматозоидов, как:

  • количество сперматозоидов;
  • подвижность;
  • морфология.

Они могут иметь абсолютно нормальные значения, но при этом сперматозоиды могут иметь большое количество повреждений ДНК.

Интересно, что яйцеклетка обладает некоторой способностью восстанавливать поврежденную ДНК сперматозоидов после оплодотворения. Однако учёные предполагают, что может быть порог повреждения ДНК, превышающий способность яйцеклетки его восстановить.

Наиболее широко используемыми методами тестирования повреждений ДНК спермы человека,являются:

  • оценка целостности ядерной ДНК сперматозоидов;
  • оценка наличия аномалий упаковки хроматина сперматозоидов.

Прямые оценки целостности ДНК сперматозоидов включают в себя терминальный дезоксинуклеотидилтрансфераз-опосредованный дезоксиуридин-трифосфатный анализ метки конца (TUNEL) спередачей ядерных материалов на месте (ISNT), в котором используются реагенты, прикрепляющиеся непосредственно к поврежденной области.

Косвенные типы оценок целостности ДНК сперматозоидов включают анализ структуры сперматозоида хроматина (SCSA) и анализ дисперсии сперматозоида хроматина (SCD), которые косвенно измеряют поврежденную область посредством денатурации белка в кислотном растворе, а также анализ кометы.

Оценка упаковки сперматозоида хроматином – это метод окрашивания, в котором используются:

  • метиловый зеленый;
  • анилиновый синий;
  • толуидиновый синий;
  • хромомицин А3.

Рассмотрим наиболее широко используемые в настоящее время оценки фрагментации ДНК.

Забор сперматозоидов из яичка

Сперматозоиды яичка, как правило, имеют меньшее повреждение ДНК и лучшую целостность ДНК, чем эякулированная сперма. Однако из-за некоторых генетических и эпигенетических рисков, возникли сомнения относительно использования сперматозоидов яичка.

Ретроспективный анализ неонатальных данных о рождении путем инъекции сперматозоидов от обструктивных и необструктивных мужчин с азооспермией не выявил существенных различий в краткосрочных неонатальных исходах. Аналогично, не было никаких существенных различий в частоте врожденных пороков развития у потомков ИКСИ от сперматозоидов яичка.

Сперматозоиды яичка имеют в три-пять раз меньшую долю фрагментации ДНК, чем сперматозоиды из эякулята. В недавнем сравнительном исследовании по использованию сперматозоидов яичка для ИКСИ у 172 пациентов с высоким уровнем повреждения ДНК сперматозоидов было обнаружено, что доля повреждения ДНК сперматозоидов яичка (8,3%) была в пять раз ниже, чем у эякулированной ДНК спермы (40,9%).

Лучшие репродуктивные результаты были продемонстрированы при использовании сперматозоидов яичка для ИКСИ в группе пациентов, у которых продолжалась олигозооспермия и высокий уровень повреждения ДНК сперматозоидов даже после антиоксидантной терапии.

Коэффициент рождаемости в группе ИКСИ, которая использовала сперматозоиды яичка, составлял 46,7%, в то время как коэффициент рождаемости в группе ИКСИ, которая использовала эякулированную сперму, составлял 26,4%. Относительные риски выкидыша и рождения составили 0,29 и 1,76 соответственно.

Кроме того, частота клинических беременностей была низкой, а риск выкидыша был высоким, когда проводилась ЭКО / ИКСИ с эякулированной спермой с высоким уровнем повреждения ДНК. Следовательно, использование сперматозоидов яичка для следующего цикла ИКСИ может быть более эффективным для пар, которые имеют высокий уровень СДФ и имеют историю неудачных ЭКО / ИКСИ.

Методы тестирования повреждения ДНК сперматозоидов не имеют четко стандартизированных уровней интерпретации результатов. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, что затрудняет его утверждение в качестве универсального, предпочтительного метода.

Репродуктивная система человека является сложной, и трудно предсказать результат динамического взаимодействия между несколькими факторами, которые могут нарушать фертильность, с помощью одного теста. Выбирайте метод тестирования, основанный на клинических характеристиках и Ваших целях.

Поскольку тесты на повреждение ДНК клеток спермы дают генетическую информацию от мужских репродуктивных клеток, в отличие от простой информации, которую предоставляет спермограмма, в будущем хорошо бы проводить дополнительные исследования методов отбора сперматозоидов с неповрежденной ДНК при ART.

Каждая пара, которая решает проблемы бесплодия, самостоятельно решает где сделать анализы, в том числе касающиеся ДНК фрагментации сперматозоидов. Важное значение при этом выборе имеет уровень клиники, а также цена, которая имеет разницу в разных медицинских учреждениях и в среднем колеблется от 6000 до 9000 рублей.

Уважаемые читатели, прошу вас дать обратную связь — анонимно проголосовать ниже за качество информации чтобы я поняла насколько хорошо раскрыта тема.

Загрузка ...

 Загрузка …

Спасибо!

Интрацитоплазматическая инъекция спермы

Исследования по ЭКО и ИКСИ обнаружили, что повреждение ДНК спермы оказывает существенное влияние на частоту беременности.  Разница в частоте беременности между группой с высоким повреждением сперматозоидов и группой с низким повреждением сперматозоидов составила 11%.

Повреждение ДНК сперматозоидов не приводило к значительной разнице в частоте клинической беременности после ИКСИ. Чем больше степень повреждения ДНК сперматозоидов, тем дольше требуется эмбриону, чтобы достичь стадии бластоцисты и снизить вероятность беременности через ИКСИ.

Тем не менее, коэффициент рождаемости более важен, чем клинический и текущий уровень беременности. Пары с низким уровнем повреждения ДНК сперматозоидов мужского пола имели высокие коэффициенты рождаемости после ЭКО и / или ИКСИ.

Влияние на результаты вспомогательной репродукции

Существуют противоречивые результаты относительно корреляции между повреждением ДНК сперматозоидов и результатами использования искусственных репродуктивных технологий (ART). Согласно некоторым исследованиям, повреждение ДНК спермы оказывает серьезное влияние на беременность, что означает, что тестирование ДНК спермы должно быть включено в рутинные клинические исследования.

Напротив, некоторые другие клинические обзоры не подтверждают клиническое использование тестов на повреждение ДНК спермы. В недавнем исследовании 120 клинических случаев, в которых анализировались результаты ART и повреждение ДНК сперматозоидов, из 92 патологических случаев, в которых анализировалась взаимосвязь между SDF и ART, в 35 наблюдалось значительное обратное соотношение между SDF и уровнем оплодотворения.

Но в других 57 исследованиях не было обнаружено существенных взаимосвязей. Обратная зависимость между повреждением ДНК спермы и скоростью оплодотворения для каждой процедуры была сильнее в ЭКО (59% или 19 из 32), чем в ИКСИ (24% или 10 или 42) или ЭКО и ИКСИ (33% или 6 из 18).

Неблагоприятное влияние повреждения ДНК на скорость оплодотворения чаще наблюдалось при процедурах ЭКО, в отличие от ИКСИ, при котором в яйцеклетку вводится наиболее морфологически нормальный и подвижный сперматозоид. Сперма, оплодотворяющая яйцеклетку при ЭКО, случайным образом выбирается при взаимодействии сперматозоидов с яйцеклетками.

Из 80 исследований, в которых анализировались SDF и качество эмбрионов, в 27 указывалось, что SDF оказывал значительное влияние на ДНК эмбрионов, в то время как в других 53 исследованиях не было выявлено значительной взаимосвязи между этими параметрами.

Рассматривая эти исследования аналитически, можно подвести итог:

1 В 64% исследований, в которых использовался кометный анализ, указывали, что повреждение ДНК сперматозоидов оказывало неблагоприятное влияние на качество эмбрионов
2 Аналогичные результаты были показаны для 25% исследований TUNEL
3 Аналогично и 24% для SCSA исследования,
4 Аналогично и 40% исследований SCD
5 При классификации по типу ART 36% исследований ЭКО, 24% исследований ИКСИ и 50% смешанных исследований ЭКО и ИКСИ выявили неблагоприятные последствия повреждения ДНК.

Таким образом, если исследования делятся по типу анализа, мы можем увидеть дифференциальную связь между повреждением ДНК спермы и качеством эмбриона. Тесты TUNEL и щелочной кометы, которые непосредственно измеряют повреждение ДНК, показали более тесную корреляцию с исходами беременности, чем SCSA и SCD, которые косвенно измеряют повреждение ДНК.

Потеря беременности.

Текущие исследования влияния SDF на выкидыш после ЭКО или ИКСИ показали, что повреждение ДНК спермы является прогностическим фактором потери беременности. При использовании анализа TUNEL повреждение ДНК сперматозоидов было более высоким у партнеров-мужчин, супруги которых перенесли повторный выкидыш (35%), чем в общей популяции (22%) или у нормальных фертильных мужчин (12%).

В исследовании, включающем 106 мужчин в парах, борющихся с проблемами фертильности, у которых в прошлом были выкидыши, обнаружили, что DFI 30% или выше был связан с высоким уровнем выкидыша и низким уровнем продолжающейся беременности.

То есть измерения SDF могут рассматриваться как полезный инструмент для прогнозирования выкидышей, связанных с отцовскими факторами.

Инфекционный контроль

Исследования показали, что инфекция и воспаление мужских половых путей наблюдаются в 8–35% случаев мужского бесплодия.Именно инфекции мужской половой системы вызывают повреждение ДНК сперматозоидов. Участвующие в воспалении клетки продуцируют активные формы кислорода, которые вызывают модификации основания ДНК и повреждение ДНК.

Белые кровяные клетки – лейкоциты, обнаруженные в сперме, происходят из эпидидимиса и мужского полового тракта, а антиоксиданты в семенной плазме поглощают активные формы кислорода, вырабатываемые белыми кровяными клетками. Однако, когда образуется большое количество активных форм кислорода, ДНК сперматозоидов повреждается окислительным стрессом.

Ю.В. Смотрова

Добрый день! Подтвердилась давняя хроническая инфекция. Что мне делать?Анализ сдавать нельзя? Детей «делать» нельзя? Был негативный опыт.

Ю.В. Смотрова

Здравствуйте! Вам необходимо лечение медикаментами в течение минимум 2–12 недель, чтобы уменьшить количество активных форм кислорода, вырабатываемых лейкоцитами, для улучшения фертильности сперматозоидов.

Метод днк комет (comet анализ)

Кометный анализ — это простой и доступный метод тестирования, который качественно измеряет степень повреждения ДНК сперматозоидов путем визуализации одно- и двухцепочечных разрывов с помощью электрофореза. Появляется изображение, похожее на комету с полной головой и хвостом.

В головке «кометы» появляется двухцепочечная ДНК, тогда как поврежденные фрагменты двух- и одноцепочечной ДНК движутся в направлении хвостовой части. Чем выше уровень повреждения ДНК, тем ярче и длиннее хвост «кометы».

Дополнительные параметры, такие как диаметр ядра, момент оливкового хвоста и длина кометы, были использованы для повышения эффективности теста. Повреждение двухцепочечной ДНК может быть измерено в нейтральном буфере, но щелочной буфер может обнаружить все повреждения одно- и двухцепочечной ДНК, а также щелочно-лабильные участки.

Щелочной кометный анализ можно использовать для всех типов клеток, включая сперму, и для анализа требуется всего несколько клеток. Клиническое значение кометного анализа в оценке мужского бесплодия подтверждено многими учёными исследователями.

Тем не менее, протоколы анализа кометы не стандартизированы до такой степени, чтобы можно было полностью понять и сравнить результаты исследований от различных исследователей. В анализе щелочной кометы трудно различить эндогенные разрывы ДНК и индуцированные разрывы ДНК, и степень повреждения ДНК может быть недооценена из-за запутывания цепей ДНК.

Некоторые не рекомендуют клиническое использование этого анализа потому, что маленький кусочек хвоста может быть потерян или его трудно визуализировать.

Некоторые исследователи представили двухкомпонентный кометный анализ, который может различать одноцепочечные разрывы ДНК и двухцепочечные разрывы ДНК в одном и том же сперматозоиде. Они успешно использовали этот метод для исследования структуры и функции ДНК сперматозоидов.

качественно измеряет степень повреждения ДНКдля анализа требуется всего несколько клетокклиническое значение кометного анализа подтверждено многими учёными исследователямипротоколы анализа не стандартизированыв анализе щелочной кометы трудно различить эндогенные разрывы ДНК и индуцированные разрывы ДНКстепень повреждения ДНК может быть недооценена из-за запутывания цепей ДНК

Показания к проведению анализа фрагментации днк сперматозоидов

1 Идиопатическое бесплодие
2 Планирование ВМИ
3 Многократные не удачные попытки ЭКО/ИКСИ
4 Остановка развития эмбрионов
5 Неполноценное развитие бластоцист
6 Исследование образцов для банков спермы

Фактически, у 15% пар с мужским бесплодием были обнаружены нормальные результаты анализа спермы. Таким образом, должны быть выполнены дополнительные тесты для оценки потенциала фертильности у мужчин. В последние 30 лет были введены новые методы тестирования для оценки аномалий спермы, что также касается определения целостности ДНК спермы.

Исследование фрагментации ДНК сперматозоидов определяет качество спермы как носителя ДНК-пакета. Повреждение ДНК, такое, как фрагментация и денатурация, может привести к бесплодию.

Специалисты в области репродукции человека отмечают, что оплодотворение сперматозоидами, имеющими поврежденные ДНК, может увеличить риск генетических заболеваний у детей.  Особенно подчеркну, что такие нарушения могут быть выявлены даже у мужчин с нормальными результатами анализа спермы.

Поэтому тест на определение ДНК фрагментации сперматозоидов, как независимого показателя для оценки качества спермы, включили в программу обязательных анализов у бесплодных пар. Особенно потому, что внутрицитоплазматическая инъекция сперматозоидов при проведении ЭКО сейчас широко распространена во всем мире, случаи успешного оплодотворения и рождения детей достаточно высоки, несмотря на плохие результаты анализа спермы и/или повреждение ДНК сперматозоидов.

И при глубоком анализе ситуации, становится понятна безусловная клиническая ценность этого тестирования. Мы живем в эпоху, когда научные медицинские достижения зашли за грань вероятного, благодаря достижениям технического прогресса последних десятилетий.

Использование сперматозоидов с поврежденной ДНК при проведении ЭКО должно быть полностью исключено.

Фрагментация ДНК сперматозоидов приводит к нежелательным результатам, таким как:

  • снижение частоты успешных беременностей;
  • увеличение частоты выкидышей;
  • хромосомных аномалий и других генетических или врожденных дефектов у потомства, даже если не у рождённых сейчас, то у последующих, не так далёких от нас, поколений человеческой популяции.

Следовательно, в эпоху ЭКО важно точно понимать, что используемая для процедуры сперма, должна гарантированно иметь целостность ядерной ДНК сперматозоидов. Хотя и для естественного запланированного зачатия детей важно учитывать тесты на определение фрагментации.

Учёные медики занимаются вопросами разработки возможных стратегий лечения для обширного повреждения ДНК спермы.

Анализ на фрагментацию ДНК – это тип теста на фертильность у мужчин, который измеряет количественный уровень поврежденной ДНК в образце спермы.

Ю.В. Смотрова

Врач сказал что у меня скорее всего есть ДНК фрагментация в сперматозоидах. Детей нет. У меня есть шансы?

Ю.В. Смотрова

Здравствуйте! Все мужчины имеют некоторые повреждения ДНК сперматозоидов – это норма, но высокий процент повреждений может указывать на большие трудности в достижении беременности.
Удачи Вам!

В течение десятилетий тестирование фертильности у мужчин основывалось почти исключительно на базовом анализе спермы (спермограмма), который изучает:

  • концентрацию;
  • морфологию;
  • подвижность сперматозоидов.

Тем не менее, около 30% мужчин, которые сталкиваются с бесплодием, после его проведения не получают ответа на вопрос, почему они бесплодны. То есть этот анализ спермы не достаточно адекватен, когда дело доходит до оценки потенциала фертильности у мужчин.

С его помощью можно определять наличие подвижных сперматозоидов, которые имеют нормальную форму, но нельзя оценить способность сперматозоидов к полноценному зачатию здоровых детей.

В последнее время растет понимание необходимости более качественного тестирования спермы. Полное изучение проводит расширенный тест качества спермы – тест Episona – это совершенно другой способ оценки качества спермы. Этот тест не нацелен на поиск общих повреждений ДНК, а ищет эпигенетические аномалии в определенных генах, играющих важную, подтверждённую научными исследованиями, ролью в фертильности и развитии эмбрионов.

Нарушения в этих генах тесно связаны с мужским бесплодием. Знание того, какие из этих генов затронуты, может дать чёткое понимание причин возникновения проблем.Но здесь мы поговорим о другом типе теста, который рассматривает фрагментацию ДНК спермы.

Полезное свойство фолиевой кислоты

После того как ученые проанализировали питание многих мужчин, они пришли к одному интересному выводу. Чем большее количество фолиевой кислоты в пище, тем меньше аномальных клеток образуется. Поэтому следует за 3-4 месяца до планирования беременности включить в рацион кислоту, которая содержится в разных продуктах. Среди растительных продуктов это:

  • зелень;
  • злаковая, бобовая культура;
  • бананы;
  • цитрусовые;
  • морковь;
  • орехи.

Кислота содержится и в продуктах животного происхождения:

  • печени и мясе говядины, свинины и баранины;
  • лососе;
  • яичном желтке.

Также она присутствует и в молочных продуктах.

При тепловой обработке некоторых продуктов потеря кислоты составляет до 90%. Поэтому по возможности их лучше употреблять в сыром виде. Включив в рацион эти продукты, можно быть уверенным в том, что анализ на фрагментацию ДНК покажет положительный результат. А это значит, что за здоровье будущего малыша волноваться не придется.

Источники

  • https://muzhchina.info/fertilnost/fragmentaciya-dnk-spermatozoidov
  • https://FB.ru/article/280552/fragmentatsiya-dnk-spermatozoidov
  • https://manbe.ru/muzhskie-bolezni/dnk-spermatozoidov-analiz-fragmentatsii-i-eyo-indeks.html
  • https://MyZachatie.ru/muzhskoj-faktor/analiz-fragmentatsii-dnk-spermatozoidov.html
  • https://KRMed.ru/articles/fragmentacia_dnk_spermatozoidov.html
  • https://men-zdrav.ru/fertilnost/dnk-fragmentaciya-spermatozoidov.html

Причины для беспокойства

К сожалению, многие мужчины не подозревают о своём бесплодии, предпочитая сваливать всё на женщин. Далеко не каждый пойдёт сдавать спермограмму, а про исследование дефрагментации ДНК кое-кто даже и не слышал. Всё это способствует всеобщему росту бесплодия в стране.

Существует несколько основных признаков, которые должны насторожить представителей мужского пола, а также навести на мысль о походе к врачу.

Причины для беспокойства:

  • несмотря на все старания в течение нескольких лет зачатие ребёнка не происходит;
  • опыт неуспешного искусственного оплодотворения;
  • выявление патологий эмбриона на ранних стадиях развития;
  • частые случаи выкидыша у жены без видимых на то причин и каких-либо патологий репродуктивной системы;
  • расширенные вены на яичках и семенном канатике;
  • повышенная температура тела на протяжении нескольких месяцев.

Безусловно, все эти признаки ещё не означают, что у мужчины проблемы с ДНК сперматозоидов. Необходим осмотр врача, он назначит все необходимые исследования, на основе которых поставит правильный диагноз.

Действенных методов коррекции дефрагментированной ДНК в мужских половых клетках, к сожалению, пока не найдено. Но поиски решения проблемы постоянно ведутся. Проводятся многочисленные исследования. Недавно выяснилось, что введение в организм веществ с антиоксидантными свойствами способствует уменьшению количества повреждённых генетических цепочек. Однако, если нарушения вызваны токсинами или высокой температурой, положительного результата не наблюдается.

Ещё одно открытие основано на наблюдении за образом жизни и питанием большого количества мужчин. В результате этого исследования выяснилась взаимосвязь между потреблением фолиевой кислоты и образованием повреждённых клеток. Диета с низким содержанием витамина В9 способствует повышению риска фрагментации в спиралях ДНК.

Причины фрагментации

Механизмы, которые приводят к фрагментации нитей ДНК, до сих пор до конца не исследованы. Одной из наиболее вероятных версий считается окислительный стресс сперматозоидов − повреждение их мембран, белков и ДНК свободными радикалами (активный кислород – ROS, или АФК).

Последние являются продуктом обменных процессов в клетках, естественным компонентом среды, в которой вызревают сперматозоиды, и семенной плазмы. В норме радикалы нейтрализуются веществами-антиоксидантами, но в ряде случаев (при воспалительном процессе, иммунных нарушениях) баланс нарушается, активных форм кислорода становится слишком много. Выявить наличие АФК можно при помощи ROS-теста.

Основные причины окислительного стресса, приводящего к фрагментации ДНК:

  • Хронические воспалительные процессы в органах малого таза: яичках, их придатках, простате, мочевом пузыре, даже в копчике (инфекция легко мигрирует с кровотоком, периодически активизируясь).
  • Варикоцеле – расширение вен мошонки, приводящее к застою крови и нарушению питания яичек.
  • Длительное воздержание (чем дольше сперматозоид находится в придатке яичка, тем выше вероятность его повреждения оксидантами).

Для чего применяется исследование фрагментации ДНК в сперматозоидах и что такое TUNEL test рассказывает ведущий уролог-андролог урологического центра “Юнона” Малышевич Виктория Владимировна

  • Интоксикация (курение, алкоголь, пестициды, гербициды). Исследования (Mutat Res за 1996 г, № 351(2), стр. 199-203, Cancer Inst за 1997 г, № 89(3), стр. 238-244) выявили прямую зависимость между онкологическими заболеваниями у детей и курением их отцов (сперматозоиды которых подверглись окислительному повреждению ДНК).
  • Длительный прием медикаментов: препараты для лечения гипертонии, подагры, противосудорожные, метадон, некоторые антибиотики.
  • Аутоиммунные нарушения, при которых организм вырабатывает антитела против собственных половых клеток.
  • Злоупотребление кофе (более 300 г в день). Кофеин способен провоцировать повреждения ДНК и препятствовать восстановлению нитей.
Есть ли у вас вредные привычки?
  • Выпиваю и курю 27%, 213 голосов

    213 голосов27%

    213 голосов — 27% из всех голосов

  • Курю 19%, 151 голос

    151 голос19%

    151 голос — 19% из всех голосов

  • Выпиваю 19%, 147 голосов

    147 голосов19%

    147 голосов — 19% из всех голосов

  • Нет 18%, 141 голос

    141 голос18%

    141 голос — 18% из всех голосов

  • Нет, веду здоровый образ жизни 17%, 131 голос

    131 голос17%

    131 голос — 17% из всех голосов

Всего голосов: 783

Голосовало: 724

17.07.2020

×

Вы или с вашего IP уже голосовали.

У 40% мужчин с бесплодием выявляется повышенный уровень активных форм кислорода (Androl за 2020, №33(6), Fertil. Steril за 1995 № 64(4)), поэтому определение их уровня является важным этапом диагностики.

Причины фрагментации днк

Исследование появилось благодаря последним достижениям науки в области изучения генетического кода человека. Каждый сперматозоид несет в головной части информацию – генетический материал мужчины. Задача носителя – проникнуть в яйцеклетку, довести свою ДНК до ядра, слить код с материнским и образовать новую клетку с уникальным набором наследственной информации.

Чтобы процесс прошел безупречно, в головке сперматозоида должна быть обеспечена непрерывность цепочек ДНК. В этом случае наследственный код сохранен, а клетка годится к производству новой жизни. Но существуют факторы (внутренние и внешние), нарушающие целостность связей.

Внутренние факторы:

  • Плохая отбраковка материала. При образовании сперматозоидов неминуемо возникают ошибки, и неполноценные спермии в норме должны быть уничтожены. Для них характерна ДНК фрагментация. Но программа уничтожения дает сбой, и бракованные клетки попадают в эякулят.
  • Ошибки при созревании половых клеток. В этом случае происходит повреждение хроматина – материала, заполняющего ядро клеток и являющегося основой хромосом. Образуются нарушения связей, разрывы в структуре ДНК.

Внешние факторы:

  • Воздействие рентгеновских лучей, химиотерапии.
  • Влияние повышенных температур внутри тела и извне.
  • Длительные хронические воспаления в половой сфере, варикоцеле.
  • Повреждение клеток свободными радикалами (активными формами кислорода). Они образуются вследствие неправильного питания, стресса, малой подвижности, заболеваний, химических зависимостей, интоксикации.

ДНК с дефектами структуры – это поврежденная информация о человеке, которая сравнима с книгой, в которой страницы с оторванными углами или замазанными строчками.

Расшифровка

После анализа выдается результат с индексом теста и снимок, на котором зафиксированы фрагментированные сперматозоиды. Индекс – это соотношение между поврежденным и здоровым, способным к оплодотворению, генетическим материалом. В норме показатель не должен быть выше 15%.


При индексе выше 15%, но ниже 30% сохраняется возможность оплодотворения яйцеклетки естественным способом, но для этого может потребоваться много времени.

Если количество поврежденных сперматозоидов в эякуляте составляет 30-50%, специалисты считают, что наступление беременности естественным путем маловероятно, поэтому рекомендуют ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение), внутриматочную инсеминацию (репродуктивная методика, предполагающая введение здоровых, полученных и отобранных заранее сперматозоидов в цервикальный канал) или ИКСИ.

Так, при показателе индекса более 30%, врачи-репродуктологи рекомендуют проводить ЭКО. Если фрагментированный генетический материал составляет 50% и выше, экстракорпоральное оплодотворение малоэффективно. Целесообразно применять интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоидов (ИКСИ). При индексе 60% и больше, шансы на успешное оплодотворение минимальны. Проводится ИКСИ, либо берется донорская сперма.

Стандартная диагностика – спермограмма

Для рождения полноценно здорового ребенка нужен хороший наследственный материал. А чтобы определить состояние мужских половых клеток, проводится стандартный анализ эякулята. Результат такого исследования покажет вероятные причины нарушения оплодотворения.

Кроме того, данное исследование позволяет определить количество лейкоцитов, которых в норме не должно быть больше одного млн в миллилитре семени. Важным параметром выступает цвет и запах. Здоровая семенная жидкость имеет белый, кремовый или чуть розовый оттенок, а по запаху напоминает каштан.

Однако специалисты считают, что стандартный анализ не может определить, была ли фрагментация ДНК. Методы обследования просто не позволяют это сделать, так как спермограмма в основном определяет только физические параметры семенной жидкости. Поэтому диагностирование цепочки ДНК этим способом произвести невозможно, и специалисты рекомендуют использовать другую распространенную методику под названием TUNEL.

Типы тестов и расшифровка результатов

Исследование сперматозоида на наличие повреждений ДНК относится к области геномики и микробиологии. В андрологии и репродуктологии применяют следующие типы тестов:

  • TUNEL. Устаревший метод, который по-прежнему практикует большинство лабораторий. Для выявления пробелов в цепочке ДНК используется светооптический эффект. Отдельные нуклеотиды маркируются и помещаются в образец спермы. Там они находят сперматозоиды с поврежденными сегментами цепочек и встраиваются в них. Половые клетки с вклинившимися в ДНК нуклеотидами будут светиться, лаборантам остается вычислить их процент в общей массе. Результат будет готов через 2 недели (в некоторых лабораториях срок продлевается до трех).
  • HALO (HALOSPERM-тест, SCD). В отличие от предыдущего метода подсвечиваются не битые, а целые ДНК. Сперму смешивают с реактивом, в результате чего вокруг нормальных сперматозоидов образуется хорошо заметный ореол (на фото ниже). Метод считается наиболее чувствительным. Результат будет готов через 1-3 дня.
  • SCSA. Сперматозоиды просвечивают лазерным лучом, под воздействием которого они окрашиваются в зависимости от степени повреждений ДНК: зеленый – норма, желтый – несущественные повреждения, красный – серьезные дефекты. Референсное (среднее для здорового мужчины) значение – 20% (меньше – норма, больше – высокий уровень фрагментации).
Анализ ДНК методом HALO
Анализ ДНК методом HALO

Тест проводится только совместно со спермограммой. Некоторые лаборатории позволяют предоставить предыдущий результат анализа, выполненного не более двух дней назад. Подготовка к сдаче теста на фрагментацию такая же, как и перед обычной спермограммой.

Цены в популярных медучреждениях (по умолчанию указана стоимость методом TUNEL без учета цены спермограммы):

  • «ДНКом»: 8340 руб.;
  • «Инвитро»: 8620 руб.;
  • «Сперматест»: 6900 руб. за HALO, 7900 руб. за TUNEL.

По завершении исследования формируется протокол, где указывается индекс фрагментации – процентное соотношение между здоровыми и дефектными сперматозоидами (DNA Fragmentation Index (DFI)). Пример заключения и референсные значения:

Заключение теста ДНК-фрагментации, выполненного методом TUNEL
Заключение теста ДНК-фрагментации, выполненного методом TUNEL

Интерпретация результатов исследования, выполненного методом HALO:

Для определения причин фрагментации назначают УЗИ органов малого таза, исследования спермы, простатического сока, крови и мочи на наличие инфекций.

Употребление антиоксидантов

Лечить фрагментацию ДНК спермограммы следует курсом лекарственных препаратов. Обычно он длится 12 недель. Кроме того рекомендуется употреблять в пищу продукты, содержащие антиоксиданты. Они повышают вероятность естественного или искусственного оплодотворения.

В ходе экспериментов доказано, что самокоррекция ДНК возможна благодаря докозагексаеновой кислоте, которая в большом количестве содержится в жире морских рыб. Она является незаменимой полиненасыщенной жирной кислотой, относящейся к классу Омега-3, и считается одной из наиболее важных составляющих межклеточных мембран, сетчатки, спермы, яичек и серого генетического материала.

Проведение теста на наличие ДНК фрагментации довольно дорогое. Однако данный анализ считается весьма информативным. Без него большое количество средств может быть потрачено на безрезультатное лечение или неудачные попытки ЭКО. Чтобы получить достоверный результат, следует правильно подготовиться к сдаче семенной жидкости и оперативно доставить ее для анализа.

При обнаружении проблем с состоянием ДНК не стоит расстраиваться. Проведение грамотной терапии повышает вероятность зачатия естественным путем или в результате искусственного оплодотворения. Это подтверждают положительные отзывы мужчин, прошедших лечение.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Notice: Trying to access array offset on value of type bool in /home/m/menemtpu/pocki.top/public_html/wp-content/themes/root/inc/admin-ad.php on line 379 Notice: Trying to access array offset on value of type bool in /home/m/menemtpu/pocki.top/public_html/wp-content/themes/root/inc/admin-ad.php on line 408
Справочник по болезням человека и животных
Adblock
detector